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谷氨酰胺合成酶(GS)測試盒實驗操作

發(fā)布時間:2021-04-14   點擊次數(shù):1492次

谷氨酰胺合成酶(GS)測試盒實驗操作

 

測定意義:GS(EC 6.3.1.2)主要存在于植物中,是生物體內(nèi)氨同化的關(guān)鍵酶之一,催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺,不僅可以防止過多的銨離子對生物有毒性,而且谷氨酰胺也是氨的主要儲存和運輸形式。
測定原理:GS 在ATP 和Mg2+存在下,催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺;谷氨酰胺進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為γ─谷氨?;惲u肟酸,在酸性條件下與鐵形成紅色的絡(luò)合物;該絡(luò)合物在540nm 處有最大吸收峰,可用分光光度計測定。
所需的儀器和用品:可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

產(chǎn)品說明: GS(EC 6.3.1.2)主要存在于植物中,是生物體內(nèi)氨同化的關(guān)鍵酶之一,催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺, 不僅可以防止過多的銨離子對生物有毒性,而且谷氨酰胺也是氨的主要儲存和運輸形式。 GS 在ATP和Mg 2+存在下,催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺;谷氨酰胺進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為γ-谷氨?;惲u肟酸, 在酸性條件下與鐵形成紅色的絡(luò)合物;該絡(luò)合物在540nm處有最大吸收峰。

注意:實驗之前建議選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進(jìn)行檢測。

需自備的儀器和用品: 可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
谷氨酰胺合成酶(GS)測試盒實驗操作
 

樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn)) 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(10 4個):提取液體 積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功 率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。 組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液), 進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。 血清(漿)樣本:直接檢測。

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